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如何鑒定氫化可的松-雞卵清白蛋白偶聯(lián)物的偶聯(lián)比?

2024-09-11 [63]

氫化可的松-雞卵清白蛋白偶聯(lián)物|Hydrocortisone-Ovalbumin Conjugate(Hydrocortisone-OVA Conjugate)

鑒定氫化可的松 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物的偶聯(lián)比可以采用以下方法:

 

一、紫外分光光度法

 

原理:利用氫化可的松和雞卵清白蛋白在不同波長下的吸光特性差異。氫化可的松在特定波長下有一定的吸收峰,雞卵清白蛋白也有其特征吸收峰。通過測量偶聯(lián)物在不同波長下的吸光度,并與單獨(dú)的氫化可的松和雞卵清白蛋白的吸光度進(jìn)行比較,可以估算出偶聯(lián)比。

步驟:

分別測定單獨(dú)的氫化可的松和雞卵清白蛋白在特定波長下的吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線。

測定氫化可的松 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物在相同波長下的吸光度。

根據(jù)吸光度值和標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算出偶聯(lián)物中氫化可的松和雞卵清白蛋白的相對含量,從而確定偶聯(lián)比。

 

二、元素分析法

 

原理:通過測定偶聯(lián)物中特定元素的含量來推算偶聯(lián)比。例如,可以測定氮元素的含量,因?yàn)殡u卵清白蛋白中含氮量相對較高,而氫化可的松中含氮量較低。通過比較偶聯(lián)物與單獨(dú)的雞卵清白蛋白中氮元素的含量變化,可以估算出偶聯(lián)比。

步驟:

采用元素分析儀測定單獨(dú)的雞卵清白蛋白和氫化可的松 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物中的氮元素含量。

根據(jù)氮元素含量的變化以及已知的雞卵清白蛋白和氫化可的松的分子結(jié)構(gòu),計算出偶聯(lián)比。

 

三、凝膠過濾色譜法

 

原理:利用不同分子量的物質(zhì)在凝膠過濾色譜柱中的洗脫行為差異。雞卵清白蛋白和氫化可的松 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物的分子量不同,通過測定偶聯(lián)物和單獨(dú)的雞卵清白蛋白的洗脫體積,可以計算出偶聯(lián)比。

步驟:

將氫化可的松 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物和單獨(dú)的雞卵清白蛋白分別上樣到凝膠過濾色譜柱中。

收集洗脫液,測定不同洗脫體積下的吸光度或其他檢測指標(biāo)。

根據(jù)偶聯(lián)物和雞卵清白蛋白的洗脫體積差異,結(jié)合已知的雞卵清白蛋白分子量,計算出偶聯(lián)比。

 

四、質(zhì)譜法

 

原理:通過質(zhì)譜分析測定偶聯(lián)物的分子量,并與單獨(dú)的雞卵清白蛋白和氫化可的松的分子量進(jìn)行比較,從而確定偶聯(lián)比。

步驟:

對氫化可的松 - 雞卵清白蛋白偶聯(lián)物進(jìn)行質(zhì)譜分析,獲得其分子量信息。

已知雞卵清白蛋白和氫化可的松的分子量,根據(jù)偶聯(lián)物的分子量變化,計算出偶聯(lián)比。

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