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孕酮-過氧化物酶標(biāo)記物的檢測方法有哪些?

2024-09-13 [77]

孕酮-過氧化物酶標(biāo)記物|Testosterone-Peroxidase Conjugate(Testosterone-HRP)

孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物的檢測方法主要有以下幾種:

 

1.酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA):

原理:利用抗原與抗體的特異性結(jié)合以及酶的催化作用。將已知量的孕酮抗體包被在酶標(biāo)板上,加入待檢測的含有孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物的樣本,樣本中的孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物會與酶標(biāo)板上的抗體結(jié)合。然后加入過氧化物酶的底物,過氧化物酶會催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生可檢測的信號,如顏色變化等。通過檢測反應(yīng)產(chǎn)物的吸光度值,可以確定樣本中孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物的含量。

操作步驟: 

預(yù)處理:對酶標(biāo)板進(jìn)行處理,如用無水乙醇浸泡、蒸餾水沖洗、烘干等,以去除酶標(biāo)板上的有機(jī)成分,保證后續(xù)反應(yīng)的準(zhǔn)確性。

包被抗體:將孕酮抗體稀釋到合適的濃度,加入到酶標(biāo)板的孔中,在一定條件下(如 4℃冰箱過夜)讓抗體與酶標(biāo)板結(jié)合。

洗滌:去除未結(jié)合的游離抗體,通常使用洗滌緩沖液進(jìn)行多次洗滌。

加樣:加入待檢樣本或標(biāo)準(zhǔn)品,以及孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物。

溫育:將酶標(biāo)板在適宜的溫度下(如 37℃)孵育一段時間,使抗原與抗體充分結(jié)合。

洗滌:再次洗滌,去除未結(jié)合的物質(zhì)。

顯色:加入底物溶液,在一定條件下(如室溫或 37℃)反應(yīng)一段時間,讓過氧化物酶催化底物產(chǎn)生顏色變化。

終止反應(yīng):加入終止液,終止顯色反應(yīng)。

檢測:使用酶標(biāo)儀在特定波長(如 450nm)下檢測各孔的吸光度值。

2.免疫層析法:

原理:基于免疫反應(yīng)和層析技術(shù)。在試紙條上預(yù)先包被孕酮抗體和其他相關(guān)試劑,當(dāng)樣本滴加到試紙條上后,樣本中的孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物會與抗體結(jié)合,然后在層析作用下沿著試紙條移動。在試紙條上會形成檢測線和控制線,如果樣本中含有孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物,檢測線會出現(xiàn)顏色變化,從而實(shí)現(xiàn)快速檢測。

操作步驟:將待檢樣本滴加到試紙條的樣本孔中,等待一段時間后,觀察試紙條上的檢測線和控制線的顏色變化。如果檢測線和控制線都出現(xiàn)顏色,說明檢測結(jié)果為陽性;如果只有控制線出現(xiàn)顏色,說明檢測結(jié)果為陰性;如果控制線都不出現(xiàn)顏色,說明試紙條無效,需要重新檢測。

3.化學(xué)發(fā)光免疫分析法:

原理:利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的發(fā)光特性進(jìn)行檢測。將孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物與樣本中的孕酮競爭結(jié)合抗體,然后加入化學(xué)發(fā)光底物,過氧化物酶會催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng),產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號。通過檢測化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度,可以確定樣本中孕酮 - 過氧化物酶標(biāo)記物的含量。

操作步驟:與 ELISA 法類似,包括包被抗體、加樣、溫育、洗滌等步驟,只是在最后檢測時使用化學(xué)發(fā)光檢測儀檢測化學(xué)發(fā)光的強(qiáng)度,而不是檢測吸光度值。

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