FITC-氨甲環(huán)酸|FITC-Tranexamic Acid

1.熒光光譜分析

激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)檢測(cè)：使用熒光分光光度計(jì)對(duì) FITC - 氨甲環(huán)酸進(jìn)行檢測(cè)。FITC 的典型激發(fā)波長(zhǎng)在 490 - 495nm 之間，發(fā)射波長(zhǎng)在 520 - 530nm 左右。如果標(biāo)記成功，當(dāng)用 490 - 495nm 的光激發(fā)時(shí)，應(yīng)該能檢測(cè)到 520 - 530nm 的熒光發(fā)射峰。并且可以將標(biāo)記后的化合物與未標(biāo)記的 FITC 和氨甲環(huán)酸分別進(jìn)行比較，未標(biāo)記的氨甲環(huán)酸在相應(yīng)波長(zhǎng)范圍內(nèi)不應(yīng)有熒光發(fā)射，而標(biāo)記后的化合物熒光強(qiáng)度應(yīng)明顯高于未標(biāo)記的氨甲環(huán)酸，從而驗(yàn)證 FITC 是否成功連接到氨甲環(huán)酸上產(chǎn)生熒光。

熒光強(qiáng)度定量：除了檢測(cè)波長(zhǎng)，還可以比較不同濃度的 FITC - 氨甲環(huán)酸溶液的熒光強(qiáng)度。一般來(lái)說(shuō)，在一定范圍內(nèi)，隨著 FITC - 氨甲環(huán)酸濃度的增加，熒光強(qiáng)度應(yīng)該呈線性增加。通過(guò)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，即繪制熒光強(qiáng)度與濃度的關(guān)系曲線，將實(shí)測(cè)樣品的熒光強(qiáng)度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，可以估算標(biāo)記產(chǎn)物的濃度，也可以驗(yàn)證標(biāo)記的一致性和穩(wěn)定性。

2.紫外 - 可見(jiàn)吸收光譜分析

FITC 在紫外 - 可見(jiàn)區(qū)域有特征吸收峰，通常在 490 - 495nm 附近，這與它的激發(fā)波長(zhǎng)相近。通過(guò)紫外 - 可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)量 FITC - 氨甲環(huán)酸的吸收光譜，若在該波長(zhǎng)附近出現(xiàn)吸收峰，且吸收強(qiáng)度與熒光強(qiáng)度變化趨勢(shì)相關(guān)（即隨著標(biāo)記程度的增加，吸收峰強(qiáng)度增加），可以作為標(biāo)記成功的一個(gè)佐證。同時(shí)，將其與未標(biāo)記的氨甲環(huán)酸和 FITC 進(jìn)行對(duì)比，未標(biāo)記的氨甲環(huán)酸在該波長(zhǎng)區(qū)域通常沒(méi)有明顯吸收峰，這樣可以更清楚地驗(yàn)證 FITC 與氨甲環(huán)酸的結(jié)合。

3.高效液相色譜（HPLC）分析

保留時(shí)間對(duì)比：使用 HPLC 對(duì) FITC - 氨甲環(huán)酸、未標(biāo)記的 FITC 和氨甲環(huán)酸進(jìn)行分離和分析。由于 FITC - 氨甲環(huán)酸的結(jié)構(gòu)與未標(biāo)記的化合物不同，它在色譜柱中的保留時(shí)間也會(huì)不同。通過(guò)比較標(biāo)記前后化合物的保留時(shí)間，可以判斷標(biāo)記是否成功。一般來(lái)說(shuō)，FITC - 氨甲環(huán)酸的保留時(shí)間會(huì)介于 FITC 和氨甲環(huán)酸之間，或者與兩者都不同，這取決于它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)和色譜柱的性質(zhì)。

純度檢測(cè)：HPLC 還可以用于檢測(cè) FITC - 氨甲環(huán)酸的純度。如果標(biāo)記過(guò)程中有未反應(yīng)的 FITC 或氨甲環(huán)酸，或者產(chǎn)生了其他雜質(zhì)，在色譜圖上會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的峰。純度較高的 FITC - 氨甲環(huán)酸應(yīng)該只有一個(gè)主峰，且峰形良好，通過(guò)計(jì)算主峰面積占總峰面積的比例可以確定其純度，從而驗(yàn)證標(biāo)記的質(zhì)量。

4.質(zhì)譜（MS）分析

分子量測(cè)定：通過(guò)質(zhì)譜分析可以準(zhǔn)確測(cè)定 FITC - 氨甲環(huán)酸的分子量。FITC 的分子量約為 389.38Da，氨甲環(huán)酸的分子量約為 157.21Da，標(biāo)記后的化合物分子量應(yīng)該是兩者分子量之和減去一個(gè)水分子的分子量（因?yàn)榉磻?yīng)過(guò)程中有一個(gè)水分子生成），即約為 546.59Da。如果質(zhì)譜結(jié)果顯示的分子量與理論計(jì)算值相符，說(shuō)明標(biāo)記成功。

碎片離子分析：質(zhì)譜還可以分析 FITC - 氨甲環(huán)酸的碎片離子，通過(guò)比較碎片離子的質(zhì)荷比和豐度與理論推測(cè)的結(jié)果，可以進(jìn)一步驗(yàn)證化合物的結(jié)構(gòu)，確定 FITC 與氨甲環(huán)酸的連接方式是否正確。

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