氨丙啉-過氧化物酶標(biāo)記物的制備方法主要有以下幾種：

戊二醛二步法

• 原理：戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價(jià)結(jié)合，形成酶-戊二醛-抗體結(jié)合物。

• 步驟：

• 取一定量的過氧化物酶（如辣根過氧化物酶，HRP），用0.1M的PBS（pH6.8）溶解，配制成一定濃度的酶溶液。

• 向酶溶液中加入適量的戊二醛，使其終濃度為0.05% - 0.1%，室溫下攪拌反應(yīng)1 - 2小時(shí)。

• 反應(yīng)結(jié)束后，用PBS透析或超濾除去未反應(yīng)的戊二醛。

• 取一定量的氨丙啉，用0.1M的PBS（pH7.2）溶解，配制成一定濃度的氨丙啉溶液。

• 將上述處理后的酶溶液與氨丙啉溶液混合，室溫下攪拌反應(yīng)2 - 4小時(shí)。

• 反應(yīng)結(jié)束后，用PBS透析或超濾除去未反應(yīng)的氨丙啉，得到氨丙啉-過氧化物酶標(biāo)記物。

過碘酸鈉法

• 原理：過碘酸鈉可將HRP分子表面的糖鏈氧化，形成醛基，再與氨丙啉上的氨基結(jié)合，形成標(biāo)記物。

• 步驟：

• 取一定量的HRP，用0.1M的PBS（pH6.8）溶解，配制成一定濃度的酶溶液。

• 向酶溶液中加入適量的過碘酸鈉，使其終濃度為0.05% - 0.1%，室溫下攪拌反應(yīng)30 - 60分鐘。

• 反應(yīng)結(jié)束后，用PBS透析或超濾除去未反應(yīng)的過碘酸鈉。

• 取一定量的氨丙啉，用0.1M的PBS（pH7.2）溶解，配制成一定濃度的氨丙啉溶液。

• 將上述處理后的酶溶液與氨丙啉溶液混合，室溫下攪拌反應(yīng)2 - 4小時(shí)。

• 反應(yīng)結(jié)束后，用PBS透析或超濾除去未反應(yīng)的氨丙啉，得到氨丙啉-過氧化物酶標(biāo)記物。

碳二亞胺法

• 原理：碳二亞胺可活化HRP分子上的羧基，使其與氨丙啉上的氨基形成酰胺鍵，從而實(shí)現(xiàn)標(biāo)記。

• 步驟：

• 取一定量的HRP，用0.1M的PBS（pH6.8）溶解，配制成一定濃度的酶溶液。

• 向酶溶液中加入適量的碳二亞胺（如EDC），使其終濃度為0.05% - 0.1%，室溫下攪拌反應(yīng)1 - 2小時(shí)。

• 反應(yīng)結(jié)束后，用PBS透析或超濾除去未反應(yīng)的碳二亞胺。

• 取一定量的氨丙啉，用0.1M的PBS（pH7.2）溶解，配制成一定濃度的氨丙啉溶液。

• 將上述處理后的酶溶液與氨丙啉溶液混合，室溫下攪拌反應(yīng)2 - 4小時(shí)。

• 反應(yīng)結(jié)束后，用PBS透析或超濾除去未反應(yīng)的氨丙啉，得到氨丙啉-過氧化物酶標(biāo)記物。

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